金丝桃苷对Nrf2-ARE途径的影响及其对肝细胞氧化应激损伤的保护作用

【摘要】核因子E2相关因子2(Nuclearfactorerythroid-2-relatedfactor2,Nrf2)通过作用于抗氧化蛋白启动子区域的抗氧化反应元件(anti-oxidantresponseelement,ARE),发挥抗氧化应激损伤作用。Nrf2-ARE是目前为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激信号通路。金丝桃苷(Hyperoside,Hyp)是广泛存在于各种植物果实及全草中的一种重要天然产物,属于黄酮醇苷化合物。它具有广泛的药理活性,其机制主要为抗氧化。氧化应激是酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、缺血再灌注肝损伤等肝脏疾病的主要发病机制。植物黄酮对肝脏疾病的防治多与其抗氧化作用有关。目的本研究以缺氧或H202损伤的人肝细胞(L02)为模型,研究Hyp对氧化应激损伤的L02细胞中Nrf2-ARE信号通路的影响,并探讨其对肝细胞的保护作用。方法离体培养L02细胞,设置正常对照组,缺氧模型组,H202模型组及Hyp高、中、低剂量三个预处理组。细胞处理结束后,CCK-8检测细胞活力,试剂盒检测SOD活性和丙二醛(MDA)含量,流式细胞仪检测活性氧(ROS)水平,探讨Hyp对氧化应激引起L02细胞损伤的预保护作用。随后重新设置正常对照组,缺氧模型组,H202模型组,单独Hyp处理组及Hyp预处理组。qRT-PCR法及、Westernblot法分析细胞保护蛋白血红素加氧酶-1(H0-1)、超氧岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)及Nrf2、BTB-CNC异体同源蛋白-1(Bachl)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)的基因和蛋白表达水平的变化,研究Hyp对氧化应激损伤的L02细胞中Nrf2-ARE信号通路的影响。结果缺氧或H202造成的氧化应激会引起L02细胞活力和SOD活性明显降低,MDA含量和ROS水平显著升高。两种方式Hyp预处理均明显改善这些指标,即削弱缺氧或H202引起的细胞活力与SOD等活性降低、MDA含量与ROS水平升高,减弱缺氧或H202引起的氧化应激损伤。qRT-PCR和、Westernblot检测结果显示,缺氧或H202造成的氧化应激均引起细胞保护蛋白HO-1和转录因子Nrf2升高。氧化损伤前、后,用Hyp处理均可进一步显著增加细胞保护蛋白HO-1、SOD、CAT、GPx和转录因子Nrf2的基因和蛋白表达水平,促进Nrf2向细胞核内转移,同时明显下调Bach1相对表达量,但对Keap1没有显著影响。结论缺氧或H202可引起L02细胞氧化应激损伤,Hyp可减弱此损伤,对L02细胞进行预保护,其机制可能是通过促进Nrf2向细胞核内转移,与Bach1竞争细胞保护蛋白启动子区域中的抗氧化反应元件(ARE),从而上调细胞保护蛋白的水平来发挥其细胞保护作用。本课题以Hyp为研究对象,从Nrf2/Keap1-Bach1竞争性调控细胞保护蛋白,促进细胞内氧化还原稳态恢复的角度探讨其作用机制,为阐明黄酮类药物药理机制提供了实验依据,为充分合理地利用传统中医药资源对抗氧化性肝损伤开拓了新策略。
【作者】张倩；
【导师】白志川；陈剑鸿；
【作者基本信息】西南大学，植物学，2014，硕士
【关键词】金丝桃苷；缺氧；H2O2；氧化应激；抗氧化蛋白；

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